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- 產(chǎn)品名稱: 堿性磷酸酶-抗體快速標記試劑盒
- 產(chǎn)品貨號: ARL0600k-1
- 貨期: 現(xiàn)貨
- 價格與訂購: 3880
- 數(shù)量:
- 規(guī)格: 200T 2000T
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
產(chǎn)品介紹
堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,以下簡稱AP)分子量140,000Da,在分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)研究中的主要應(yīng)用是從DNA中去除5'-磷酸基團或作為免疫分析(如ELISA)的報告系統(tǒng)。在免疫分析測試中,酶通常與特定的一級或二級抗體結(jié)合,其活性用顯色(或發(fā)光)底物檢測。
本試劑盒可以幫助實驗者快速實現(xiàn)AP與抗體的偶聯(lián)。
基本原理
本試劑盒利用抗體和AP上游離的伯氨基(-NH2),采用定向?qū)优悸?lián)技術(shù)將抗體分子與AP共價偶聯(lián),主要特點:
1、試劑盒組分齊全,操作簡單,只要按照操作步驟進行便可得到高品質(zhì)AP偶聯(lián)抗體;
2、本試劑盒所配置的AP為高純度,高活性酶,催化發(fā)光/顯色效率更高;
3、本試劑采用定向偶聯(lián)技術(shù),AP酶和抗體都不會發(fā)生自連,保證偶聯(lián)物的特異性和均一性;
試劑盒已經(jīng)提供材料
試劑盒規(guī)格 | 20X3T | 200X1T | 200X3T | 2000X1T |
可標抗體量 | 30∽60ug | 100∽200ug | 300∽600ug | 1∽2mg |
可標抗體次數(shù) | 3 | 1 | 3 | 1 |
組分名稱 | 各組分配置數(shù)量 | |||
活化AP凍干粉 | 50ugX3 | 500ug | 500ugX3 | 5mg |
標記緩沖液 | 30ml | 30ml | 30ml | 30ml |
抗體修飾試劑 | 30ul*1 | 30ul*1 | 30ul*1 | 30ul*1 |
30KMWCO超濾管 | 3支 | 1支 | 3支 | 1支 |
封閉試劑 | 50ug*3支 | 50ug*1支 | 50ug*3支 | 50ug*1支 |
DMSO溶劑 | 200ul | 200ul | 200ul | 200ul |
說明書 | 1份 |
其他需要自備試劑材料
待標記的生物分子;
移液器及吸頭;
去離子水。
試劑盒儲存
試劑盒抗體修飾試劑放在-20?C,其余組分放在2-8℃可保存6個月以上。
試劑盒操作流程
1.抗體的修飾
1)取待標記抗體(純度>90%),濃度調(diào)整到 5mg/ml左右為宜,按照每mg抗體加入
2μl 抗體修飾試劑溶液,輕輕混勻,在室溫下避光攪拌反應(yīng) 90分鐘;【如果抗體量太少,抗體修飾試劑溶液加入量不少于0.5ul】
2)反應(yīng)完畢后,將其轉(zhuǎn)入30KMWCO超濾管,用標記緩沖液超濾3-5次(每次12000rpm 5min),每次管芯內(nèi)液體體積不超過原體積1/4為宜,最后一次超濾完成,管芯內(nèi)液體即為修飾的抗體。
2.活化AP與抗體偶聯(lián)
1)用標記緩沖液復(fù)溶活化AP凍干粉,得到活化AP溶液,濃度調(diào)整為5mg/ml(如,按50ug活化AP凍干粉加入10ul標記緩沖液復(fù)溶);
2)將修飾抗體與活化AP溶液,按照質(zhì)量比1:2.5比例(每mg修飾抗體對應(yīng)2.5mg活化AP溶液,50ug 活化AP可以標記20ug抗體)混合,室溫避光反應(yīng)2小時;
3)將封閉試劑管中加入5ul DMSO,配置成10mg/ml封閉試劑溶液;按照每0.5mg抗體5ul的體積比例加入上述步驟2)反應(yīng)產(chǎn)物中,封閉未反應(yīng)完的活性基團;【如果抗體量太少,抗體封閉試劑溶液加入量不少于0.5ul】
4)標記好的抗體分裝,加入適當(dāng)保護劑,-20℃保存?zhèn)溆谩?/div>
注意事項
1)本試劑盒中抗體修飾試劑和封閉試劑為高活性試劑,請-20℃保存;其余成份2-8℃保存、勿凍存。
2)試劑盒組份在運輸過程中可能造成顛倒,會使液體或干粉試劑粘到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理,以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。
3)本試劑盒中活化AP凍干粉需要避光低溫保存,一旦復(fù)溶請一次性使用完;標記過程盡量保證其避光;
4)封閉劑需現(xiàn)用現(xiàn)配,干粉溶解后不能長期保存;
5)使用本試劑盒標記抗體,其抗體特異性要高,純度不低于90%,最好使用單克隆抗體,溶液環(huán)境不含游離氨基,最好為PBS溶液;標記前抗體需去除NaN3和BSA,抗體的透析、濃縮和濃度測定等操作都會造成抗體量的損失,因此標記前準備抗體時需根據(jù)具體情況考慮最適的抗體量;
6)由于抗體修飾后所帶的基團容易被重新氧化,因此修飾后抗體需盡快與活化的AP進行偶聯(lián);
7)本試劑盒中的超濾管為特殊處理的,可有效避免酶失活和蛋白吸附損失,市面超濾管可能會對標記效率造成影響。
8)本試劑盒中部分試劑為高活性試劑,對皮膚和身體有一定的危害,請全程戴手套操作;DMSO屬微毒類,對人體皮膚有滲透性,對眼有刺激作用,使用時避免與皮膚、眼睛和粘膜接觸。
Note
For research use only .
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