瀏覽量: 167
- 產(chǎn)品名稱: DNaseⅠ, RNase-Free
- 產(chǎn)品貨號(hào): CSME0108
- 貨期: 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購(gòu): 300
- 數(shù)量:
- 規(guī)格: 1KU
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購(gòu)
產(chǎn)品概述
DNaseⅠ(脫氧核糖核酸酶Ⅰ),即DeoxyribonucleaseⅠ,是一種可消化單鏈或雙鏈DNA的脫氧核糖核酸內(nèi)切酶,它識(shí)別并切割磷酸二酯鍵,產(chǎn)生5'端為磷酸基團(tuán),3'端為羥基的單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸。DNaseⅠ的活性依賴于Ca2+,并可被二價(jià)金屬離子Mg2+、Mn2+等激活。在Mg2+存在的情況下,該酶可隨機(jī)識(shí)別并切割雙鏈DNA任意一條鏈上的任意位點(diǎn);而在Mn2+存在的情況下,可識(shí)別并切割DNA兩條鏈上幾乎相同的位點(diǎn),產(chǎn)生平末端或有1 - 2個(gè)核苷酸突出的粘末端DNA片段。
產(chǎn)品組分
組 分 | CSME0108 (1,000 U) |
DNaseⅠ(2 U/μl) | 0.5 ml |
10×Reaction Buffer | 1.25 ml |
保存條件
-30 ~ -15℃保存。運(yùn)輸條件:≤0℃。
單位定義
37℃ 10 min,將能夠完全降解1 μg pUC19質(zhì)粒DNA所需的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制
純度:≥90%;
RNase殘留檢測(cè):使用100 U本品,參照RNaseAlert QC System說(shuō)明書未檢測(cè)到RNase殘留;
功能檢測(cè):投入500 ng 人源基因組DNA,經(jīng)1 U DNaseⅠ處理后,進(jìn)行兩對(duì)質(zhì)控引物的qPCR檢測(cè),清除效率>99.9%。
適用場(chǎng)景
適用于RNA提取、體外轉(zhuǎn)錄、RT-PCR實(shí)驗(yàn)中DNA的去除,DNaseⅠ印跡(DNaseⅠ footprinting),缺口平移 (nicktranslatioin),DNA隨機(jī)片段文庫(kù)構(gòu)建等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1. 在使用本品進(jìn)行RNA樣品中DNA的清除實(shí)驗(yàn)時(shí),可在反應(yīng)體系中添加Murine RNase Inhibitor以保護(hù)RNA不被降解。
2. 部分實(shí)驗(yàn)條件下,DNaseⅠ的最佳使用量需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行調(diào)整。
3. 失活或抑制:加入終濃度為5 mM的EDTA并經(jīng)過(guò)65℃加熱10 min,或通過(guò)酚氯仿抽提可使DNaseⅠ失活。此外,使用金屬離子螯合劑, 達(dá)到毫摩爾/升濃度的鋅離子,0.1%的SDS,DTT、巰基乙醇等還原劑,50 - 100 mM以上鹽濃度均對(duì)DNaseⅠ的活性有顯著抑制作用。
應(yīng)用實(shí)例
體外轉(zhuǎn)錄后模板DNA的去除
1. 每0.5 μg模板DNA的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中加入1 U DNaseⅠ;
2.用移液槍輕輕吹打混勻,37℃ 15 min;
3.酚/氯仿抽提失活DNaseⅠ。
Note
For research use only .